法醫物證 DNA 又被稱(chēng)為“新一代物證之王”。然而,隨著(zhù)犯罪嫌疑人反偵察能力的提高,遺留在案犯現場(chǎng)的物證DNA十分有限,且含有大量抑制物,如何從微量物證檢材中提取到足夠多的 DNA 用于遺傳標記物分型鑒定,一直是法醫物證 DNA 分析檢驗的難點(diǎn)。
針對這一問(wèn)題,團隊提出基于“電荷吸附”原理的微量DNA高效富集新方法,使用1%濃度的殼聚糖修飾50nm磁性顆粒,在酸性條件下,通過(guò)靜電作用吸附帶負電荷的DNA。為模擬實(shí)際案件現場(chǎng),團隊制備了含有腐殖酸、色素、鐵繡以及以上三種物質(zhì)共存的實(shí)驗樣品,將人支氣管上皮細胞與上述樣品混合,并使用400 L裂解緩沖液、20 L蛋白酶K(10 mg/mL)和20 L殼聚糖磁性珠溶液(20 mg/mL)進(jìn)行細胞裂解和DNA富集。研究結果表明,殼聚糖磁性珠的提取靈敏度為10個(gè)細胞以下量級,優(yōu)于現有方法,且殼聚糖磁珠提取的DNA無(wú)需洗脫,可直接進(jìn)行“原位PCR擴增”。該方法提取的DNA樣品 STR位點(diǎn)的檢出率達到97.9%,高于現有同類(lèi)方法(66.7%)。該方法的優(yōu)勢不僅在于DNA的高效富集,而且通過(guò)靜電吸附的方式避免了傳統方法可能導致的DNA斷裂,提高了STR位點(diǎn)檢出率。該成果在法醫物證 DNA 鑒定,祖源分析、烈士遺骸鑒定、重大災難遇難者身份確認等領(lǐng)域具有廣闊應用前景。
碩士研究生胡安中為論文第一作者,朱燦燦副研究員為通訊作者。該項研究工作得到了國家重點(diǎn)研發(fā)計劃、國家自然科學(xué)基金,安徽省重點(diǎn)研發(fā)計劃等項目支持。
論文鏈接:www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1872497323001072
殼聚糖納米磁珠吸附原理及過(guò)程
殼聚糖納米磁珠與傳統方法DNA提取性能對比